技术服务描述

转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式因子，转录因子的DNA结合域和顺式因子实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。萤光素酶报告基因实验（luciferase Assay）是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段，其原理简述如下：（1）用靶启动子的特定片段替换报告基因质粒（如pGL3-basic）的启动子区。（2） 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转。如果该转录因子能够激活靶启动子，则萤光素酶就会表达，且其表达量与转录因子的作用强度成正比。（3） 加入特定的底物，萤光素酶与底物反应，产生萤光素，检测荧光的强度可以对萤光素酶的活性定量，进而判断该转录因子能否与靶启动子片段发生作用 （及其作用强度）。

Promoter活性Luciferase实验常用载体——pGL3

Promoter片段缺失Luciferase分析

PCR扩增Luciferase点突变靶基因

服务流程

1. PCR扩增靶基因的Promoter，或直接合成结合位点序列；

2. 片段裁切或点突变设计靶基因的Promoter并以PCR扩增，或直接合成序列；

3. 将上述不同DNA片段分别克隆至报告载体pGL4质粒；

4. 将报告载体转染待检细胞；

5. 多功能酶标仪检测报告基因的表达水平。

客户提供

1. 目的基因、目的miRNA的相关信息；

2. 目的miRNA的模拟物（mimic）或抑制物（inhibitor）；

3. 作克隆模板用途的细胞或组织样品；

4. 需转染并作最后检测用途的细胞样品。

赛诚提供

1. 原始数据、结果图片；

2. 标准实验报告；

3. SCI标准Result Figure。