项目名称:Luciferase(启动子活性验证)

Luciferase(启动子活性验证)

所属分类:Lucifefase实验

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转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子,也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合,这些特异性的序列被称为顺式因子,转录因子的DNA结合域和顺式因子实现共价结合,从而对基因的表达起抑制或增强的作用。萤光素酶报告基因实验(luciferase Assay)是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段,其原理简述如下:(1)用靶启动子的特定片段替换报告基因质粒(如pGL3-basic)的启动子区。(2 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转。如果该转录因子能够激活靶启动子,则萤光素酶就会表达,且其表达量与转录因子的作用强度成正比。(3 加入特定的底物,萤光素酶与底物反应,产生萤光素,检测荧光的强度可以对萤光素酶的活性定量,进而判断该转录因子能否与靶启动子片段发生作用 (及其作用强度)。

 

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Promoter活性Luciferase实验常用载体——pGL3

 

7.2 Promoter片段缺失Luciferase分析.png

Promoter片段缺失Luciferase分析

 

7.3 PCR扩增Luciferase点突变靶基因.png

PCR扩增Luciferase点突变靶基因

 

服务流程

1. PCR扩增靶基因的Promoter,或直接合成结合位点序列;

2. 片段裁切或点突变设计靶基因的Promoter并以PCR扩增,或直接合成序列;

3. 将上述不同DNA片段分别克隆至报告载体pGL4质粒;

4. 将报告载体转染待检细胞;

5. 多功能酶标仪检测报告基因的表达水平。

 

客户提供

1. 目的基因、目的miRNA的相关信息;

2. 目的miRNA的模拟物(mimic)或抑制物(inhibitor);

3. 作克隆模板用途的细胞或组织样品;

4. 需转染并作最后检测用途的细胞样品。

 

赛诚提供

1. 原始数据、结果图片;

2. 标准实验报告;

3. SCI标准Result Figure