技术服务描述

萤光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响，而双报告基因则通过共转染的“对照”作为内参为实验提供一基准线，从而可以在最大程度上减小细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响，使得数据结果更为可信。Dual-Luciferase双萤光素酶报告基因检测系统在细胞中同时表达萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶，两者没有种源同源性并对应不同的反应底物，故而没有交叉干扰。得益于超强的光信号和超高的信噪比，本系统被广泛用于miRNA靶基因验证。

由于miRNA主要通过作用于靶基因的3’UTR起作用，可以将目的基因3’UTR区域构建至载体中报告基因luciferase的后面， 通过比较过表达或者干扰miRNA后，报告基因表达的改变（监测萤光素酶的活性变化）可以定量反映miRNA对目的基因的抑制作用；结合定点突变等方法进一步确定miRNA与靶基因3’UTR的作用位点。

miRNA靶基因Luciferase实验常用载体——psiCHECK2

PCR扩增Luciferase点突变靶基因

服务流程

1. PCR扩增靶基因的3’-UTR（WT），或直接合成结合位点序列；

2. 点突变设计靶基因的3’-UTR（MUT）并以PCR扩增，或直接合成序列；

3. 将上述两种DNA片段分别克隆至报告载体psiCHECK2质粒；

4. 将报告载体与模拟物（mimic）或抑制物（inhibitor）共转染待检细胞；

5. 多功能酶标仪检测报告基因的表达水平。

客户提供

1. 目的基因、目的miRNA的相关信息；

2. 目的miRNA的模拟物（mimic）或抑制物（inhibitor）；

3. 作克隆模板用途的细胞或组织样品；

4. 需转染并作最后检测用途的细胞样品。

赛诚提供

1. 原始数据、结果图片；

2. 标准实验报告；

3. SCI标准Result Figure。