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荧光素酶检测技术(Luciferase)Model Figures
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实验技术流程
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实验常见问题
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结果分析
在分析转录调控作用位点时,一般先采取Luciferase片段缺失实验初步分析,确定目标调控因子是否调控目标基因的转录及大概的作用区域。对缩小范围的区域进行生物信息学预测可能位点后,采用Luciferase定点突变实验确定真正的转录调控位点。标准结果及结论如下所示:
1 Luciferase片段缺失实验
经检测发现多次裁切对荧光素酶表达量产生的影响相同(即检测组与空白组有明显差异,但各裁切的检测组间没有明显差异),故可推断转录调控位点应位于-282~近启动子端区域。
2 Luciferase定点突变实验
对不同位点(生物信息学预测)分别进行点突变,LXRE2位点突变后的检测组与野生型的检测组间存在明显差异,而LXRE1位点突变后的检测组与野生型的检测组间没有明显差异,故可推断转录调控位点应为LXRE2。
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