荧光素酶报告基因检测法是转录调控研究中十分重要的实验手段。但其结果往往存在一定的误差。为解决这一问题，现普遍采用双荧光素酶报告基因检测法。在双荧光素酶报告基因测试中，将萤火虫荧光素酶作为实验报告基因，海肾荧光素酶作为对照报告基因。实验报告基因用于测试实验条件下基因的表达，而对照报告基因作为内对照，以使实验报告基因测试的结果归一化。作归一化可消除实验过程中减弱实验准确度的变化，如培养细胞的数量、细胞转染及裂解的效率等。在研究转录调控启动子活性中，具体实验步骤如下。

1 质粒转染细胞

1.1 细胞铺板：将细胞按70%的汇合度接种到96孔板。

1.2 转染：16h后转染萤光素酶报告基因质粒和RNA，每个样品设置6个复孔

（1）配制DNA和转染试剂: 96孔板转染质粒时每孔比例为pLenti：Firefly：Renilla：转染试剂=0.2μg：0.1μg：0.01μg：0.25μL

（2）稀释好DNA及转染试剂，常温孵育5min

（3）将稀释好的DNA分别和转染试剂混匀，常温孵育20min

（4）每孔弃去15μL培养基，将15μL DNA转染混合液添加到每孔细胞样品中

（5）转染6h后，换新鲜完全培养基

2 双报告基因检测

（1）质粒共转染48h后，弃去培养基，用100μL 1XPBS洗1遍

（2）倾斜96孔板，吸干剩余的PBS

（3）去离子水将5XPLB稀释成1XPLB，使用前放到常温

（4）每孔加50μL稀释好的1X PLB，摇床常温条件下摇15min，进行裂解

（5）白色不透光的96孔酶标板中每孔加步骤4的上清液10μL，加入100μL预先混好的LAR II，2s后测数据

（6）每孔添加100μL预先混好的Stop&Glo Reagent，静止2s后，测数据

• 1 . miRNA的概述
  • 1.1. miRNA的生物发生
  • 1.2. miRNA的作用机制
  • 1.3. miRNA的研究展望
  • 1.4. miRNA与癌症
  • 1.5. miRNA在转化医学中的应用
• 2 . lncRNA的概述
  • 2.1. lncRNA的研究背景
  • 2.2. lncRNA的作用机制
  • 2.3. lncRNA的研究展望
  • 2.4. lncRNA与癌症
  • 2.5. lncRNA与临床疾病
• 3 . miRNA与lncRNA研究策略
  • 3.1. miRNA的一般研究策略
  • 3.2. AGO2在miRNA研究中的应用
  • 3.3. LncRNA的一般研究策略
  • 3.4. miRNA与lncRNA的生物信息学预测
• 4 . miRNA与lncRNA研究实验
  • 4.1. RNA 结合蛋白免疫沉淀技术（RIP）Model Figures
  • 4.2. RNA结合蛋白免疫沉淀技术（RIP）实验流程
  • 4.3. RNA结合蛋白免疫沉淀技术（RIP）实验常见问题
  • 4.4. RNA pull - down Model Figures
  • 4.5. RNA pull- down实验流程
  • 4.6. RNA pull- down实验常见问题
  • 4.7. 荧光素酶检测技术（Luciferase）Model Figures
  • 4.8. 荧光素酶检测技术（Luciferase）实验流程
  • 4.9. 荧光素酶检测技术（Luciferase）实验常见问题