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实验技术流程

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实验常见问题

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结果分析

      在分析转录调控作用位点时，一般先采取Luciferase片段缺失实验初步分析，确定目标调控因子是否调控目标基因的转录及大概的作用区域。对缩小范围的区域进行生物信息学预测可能位点后，采用Luciferase定点突变实验确定真正的转录调控位点。标准结果及结论如下所示：

      1 Luciferase片段缺失实验

      经检测发现多次裁切对荧光素酶表达量产生的影响相同（即检测组与空白组有明显差异，但各裁切的检测组间没有明显差异），故可推断转录调控位点应位于-282~近启动子端区域。

      2 Luciferase定点突变实验

      对不同位点（生物信息学预测）分别进行点突变，LXRE2位点突变后的检测组与野生型的检测组间存在明显差异，而LXRE1位点突变后的检测组与野生型的检测组间没有明显差异，故可推断转录调控位点应为LXRE2。

• 1 . 基因表达调控概述
  • 1.1. 转录调控与转录激活
  • 1.2. 转录后调控
  • 1.3. miRNA与lncRNA
• 2 . 基因表达调控研究进展
• 3 . 基因表达调控研究方法
• 4 . 基因表达调控主要实验技术
  • 4.1. 染色质免疫沉淀技术 ChIP
  • 4.2. RNA结合蛋白免疫沉淀技术 RIP
  • 4.3. RNA pull-down
  • 4.4. DNA pull-down
  • 4.5. 荧光素酶检测技术 Luciferase
  • 4.6. 凝胶迁移/电泳迁移率实验 EMSA