CRISPR-dCas9系统

 dCas9蛋白是Cas9蛋白的突变体，即Cas9内切酶的RuvC1和 HNH两个核酸酶活性区域同时发生突变。因此，dCas9蛋白的内切酶活性全部消失，只保留由gRNA引导进入基因组的能力。

    CRISPR-dCas9系统提供了一个研究定点转录调控的平台。在这个平台中，dCas9主要是与其他效应蛋白融合（如GFP、转录因子、组蛋白修饰等），进行基因调控，基因组成像，染色质或DNA修饰以及染色质免疫沉淀等。

Figure 8 ： The Cas9 null mutant has lost both of its DNA cleavage domains while still retaining its ability to target genomic loci through gRNA:DNA interactions. By fusing effector domains to the Cas9 null mutant, it is possible to activate gene expression (i.e. V964 or NF-kB), repress gene expression (i.e. KRBA domain), visualize genomic loci (i.e. EGFP), perform chromatin remodelling (i.e. TET proteins), and simplify chromatin immunopercipitation (through an antibody epitope tag)

• 1 . CRISPR-Cas9系统
  • 1.1. CRISPR-Cas9组成
  • 1.2. 作用机制
  • 1.3. 不同的Cas9系统
  • 1.4. Cas9-基因敲除
  • 1.5. Cas9-敲入系统
• 2 . CRSPER- dCas9系统
  • 2.1. dCas9-转录调控系统
  • 2.2. dCas9-基因激活与抑制系统
  • 2.3. dcas9-表观遗传系统
• 3 . dCas9技术路线
  • 3.1. gRNA设计
  • 3.2. dCas9实验流程
  • 3.3. 实验问题与解决方案