CRISPR-dCas9定点调控技术路线

概要：

1.设计sgRNA

2.构建sgRNA表达载体

3.构建dCas9-SAM基因激活表达载体，dCas9-KRAB基因沉默表达载体

4.建立dCas9-SAM稳转株、dCas9-KRAB稳转株

5 .转染sgRNA

6 .ChIP检测dCas9系统的靶向效率

7 .qPCR或WB检测下游基因表达

• 1 . CRISPR-Cas9系统
  • 1.1. CRISPR-Cas9组成
  • 1.2. 作用机制
  • 1.3. 不同的Cas9系统
  • 1.4. Cas9-基因敲除
  • 1.5. Cas9-敲入系统
• 2 . CRSPER- dCas9系统
  • 2.1. dCas9-转录调控系统
  • 2.2. dCas9-基因激活与抑制系统
  • 2.3. dcas9-表观遗传系统
• 3 . dCas9技术路线
  • 3.1. gRNA设计
  • 3.2. dCas9实验流程
  • 3.3. 实验问题与解决方案