CRISPR dCas9—转录调控系统

      2013年，齐等人将来自化脓性链球菌的Cas9的核酸酶结构域（在HNH结构域中产生H840A突变和在RuvC结构域中产生D10A突变）进行突变，以产生核酸酶缺陷的“dCas9”。这种“钝化”和“死亡”Cas9失去切割DNA的功能，但在gRNA的指导下仍能以相同的精确度靶向和结合DNA。

      dCas9蛋白可以与效应器（如阻遏蛋白和激活剂结构域）形成融合蛋白，这样，dCas9可以将这些效应器带到启动子区域、调控区域或编码区域，对任何基因进行精确定点调控而不造成DNA损伤。可用于研究转录因子或辅助转录因子对特定基因的影响。

Figure 1 :dCas9 as a modular system for attachment of transcriptional regulators. dCas9 can easily be fused to effectors (either transcription activators or repressors) for targeted gene regulation. Adapted from Figure 1a of Gilbert et al. (2013).

• 1 . CRISPR-Cas9系统
  • 1.1. CRISPR-Cas9组成
  • 1.2. 作用机制
  • 1.3. 不同的Cas9系统
  • 1.4. Cas9-基因敲除
  • 1.5. Cas9-敲入系统
• 2 . CRSPER- dCas9系统
  • 2.1. dCas9-转录调控系统
  • 2.2. dCas9-基因激活与抑制系统
  • 2.3. dcas9-表观遗传系统
• 3 . dCas9技术路线
  • 3.1. gRNA设计
  • 3.2. dCas9实验流程
  • 3.3. 实验问题与解决方案