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1. CHIP-seq
ChIP-Seq技术是研究蛋白质与DNA相互作用的有力工具,利用该技术可以检测转录因子与DNA的动态调控作用,各种组蛋白修饰,染色质调控因子等,转录因子与组蛋白修饰的ChIP-Seq示意图如下:
ChIP-Seq技术包括两部分:建库和测序,建库和测序的质量对于后续分析尤为关键,但是建库前ChIP实验的设计也同样重要。从实验的操作来讲ChIP主要分为两大类,一类是X-ChIP,一类是N-ChIP。其中N-ChIP不涉及甲醛交联,更适合那些和DNA有强相互作用的蛋白ChIP-seq实验,主要就是组蛋白;而X-ChIP采用甲醛交联就没有这个限制,广泛适用于转录因子, 组蛋白, 聚合酶等蛋白的结合片段测序。
实验流程、建库流程、分析流程:
1.1. Chip-seq可以告诉我们什么信息
chip-seq可以告诉我们一些什么信息?
基础分析系列:
我们实验处理后送样测序的数据基本情况(测序下机数据质量情况)
这些测序数据都分布在参考基因组的什么位置,以及比对结果如何(比对参考基因组情况)
这些reads的分布有哪些区域具有显著成峰(Peak)特征(CallPeak情况)
这些Peak区域可能影响到的基因是什么,这些Peak距离基因多远,又位于什么区域(Peak附近的临近基因注释结果及可视化情况统计)
这些基因都普遍具有什么样的功能(富集到什么通路上,临近注释基因集的富集结果)
这些Peak结合区域,都可能结合到一些什么样的蛋白(motif预测情况)
高级分析系列:
差异Peak分析:可以寻找到两组不同生物模型比较表观水平的改变差异
Chip-seq与RNA-seq联合分析:可以寻找一些表观水平差异与基因转录水平改变的关联性
超级增强子(SEs, Super-enhancers )鉴定分析:可以找到影响转录水平异常增加的一系列表观水平的相互作用区域
核心调控网络(CRC, Core transcription regulatory circuitry )分析:可以从SEs中通过调控网络关系找到的核心影响转录因子
1.1.1. chip seq 报告解读
我们的Chip-seq分析报告展示:
分析案例:
报告解读:
1.1.2. Peak_Motif分析意义(homer)
homer_motif 分析能给到我们什么信息?