RNA pull-down

RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA pull-down使用体外转录法标记生物素RNA探针，然后与胞浆蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合，从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过Western Blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RNA相互作用。

在RNA pull-down实验过程中我们设置一系列的质控标准以确保每一步实验的真实有效，如RNA探针模板PCR扩增跑胶检测、体外转录产物跑胶检测、产物银染图。具体示例如下图所示：

  RNA探针体外转录后消化DNA模板，然后跑胶检测RNA探针质量。

RNA pull-down产物通过跑胶银染检测实验组与对照组是否含有差异条带，以确保结果的可靠性。

RNA pull-down实验结果一般为产物的WB验证或MS分析数据，如图为RNA pull-down产物的WB结果示例。

以反义链RNA探针为阴性对照，结果表明目的RNA与蛋白能够特异性的结合。

• 1 . 基因表达调控
  • 1.1. 表观遗传修饰调控
  • 1.2. 转录水平调控
  • 1.3. 转录后水平调控
• 2 . 基因表达调控实验技术
  • 2.1. CHIP 染色质免疫沉淀技术
  • 2.2. RIP RNA结合蛋白免疫沉淀技术
  • 2.3. CHIRP 免疫共沉淀实验
  • 2.4. CLIP实验技术
  • 2.5. RNA pull-down
  • 2.6. DNA pull-down
  • 2.7. RNA-RNA pull-down
  • 2.8. Luciferase 荧光素酶实验
  • 2.9. DNA/RNA EMSA 凝胶电泳迁移实验
  • 2.10. FISH 免疫荧光原位杂交技术
  • 2.11. ​核质分离