FISH 免疫荧光原位杂交技术

免疫荧光原位杂交是在组织、细胞等水平上对蛋白、DNA或RNA进行定性、定位和定量分析的实验技术。

1、RNA FISH

用已知的荧光标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸，通过激光激发产生荧光来检测目标核酸。

在RNA-FISH实验过程中我们设置一系列的质控标准以确保每一步实验的真实有效，如探针模板DNA片段PCR扩增跑胶图、体外转录产物跑胶图。具体示例如下图所示：

探针跑胶图，泳道一为探针体外转录模板DNA，泳道二为体外转录标记的RNA探针。

RNA-FISH结果示例：

上图为RNA-FISH结果示例，是对细胞内LncRNA BCAR4的定位，以actin mRNA作为内参，以SCR作为阴性对照。从图可看出LncRNA BCAR4位于细胞核内。

2、蛋白FISH

用目的蛋白抗体与细胞进行孵育，然后用带荧光标记的二抗孵育检测细胞内蛋白表达和定位。

蛋白FISH示例：

上图为蛋白FISH结果的一个示例，检测的是LncRNA正常表达细胞和过量表达细胞中的Vimentin蛋白，E1和E2组是LncRNA正常表达的细胞，OC1和OC2是LncRNA过量表达的细胞。从上图可清晰的看到LncRNA过量表达的细胞Vimentin蛋白明显高于正常表达的细胞。

   3、RNA-蛋白FISH

用已知的荧光标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸，然后用目的蛋白抗体与细胞进行孵育，用带荧光标记的二抗孵育检测细胞内RNA和蛋白的表达和互作定位。

在RNA-蛋白FISH实验过程中我们设置一系列的质控标准以确保每一步实验的真实有效，如DNA片段PCR扩增跑胶图、体外转录产物跑胶图。具体示例如下图所示：

探针跑胶图，泳道一为探针体外转录模板DNA，泳道二为体外转录标记的RNA探针。

RNA-蛋白FISH示例：

上图为RNA-蛋白FISH结果的一个示例，检测的是LncRNA OLA1P2与磷酸化了的转录因子STAT3的关系，从上图可看出两者均位于细胞质中并且出现的位置重合，说明两者之间有互作关系。

• 1 . 基因表达调控
  • 1.1. 表观遗传修饰调控
  • 1.2. 转录水平调控
  • 1.3. 转录后水平调控
• 2 . 基因表达调控实验技术
  • 2.1. CHIP 染色质免疫沉淀技术
  • 2.2. RIP RNA结合蛋白免疫沉淀技术
  • 2.3. CHIRP 免疫共沉淀实验
  • 2.4. CLIP实验技术
  • 2.5. RNA pull-down
  • 2.6. DNA pull-down
  • 2.7. RNA-RNA pull-down
  • 2.8. Luciferase 荧光素酶实验
  • 2.9. DNA/RNA EMSA 凝胶电泳迁移实验
  • 2.10. FISH 免疫荧光原位杂交技术
  • 2.11. ​核质分离